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Materiales y Métodos
Desde febrero del 2006 hasta octubre del 2007 se analizaron
80 pacientes con diagnóstico de cervicitis
crónica, debida a una infección con PVH. Los
pacientes presentaban edades que iban desde
los 20 hasta los 88 años con una media
poblacional de 39 años. Las muestras fueron
cepillados cervicales enviados por
diferentes Servicios de Ginecología de
Guayaquil. A partir de la muestra recibida
se procedió a concentrar las células y
extraer ADN con fenol-cloroformo.
La detección del genotipo viral fue realizada por PCR – dot
blot reverso (kit Innolipa-VPH), siguiendo
las indicaciones del fabricante (Tabla 1).
El resultado fue interpretado luego de
verificar los números de bandas reactivas
resultantes del proceso de hibridación
(figura 1).
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Tabla 1. Condiciones de
amplificación y detección de
genotipo por PCR-dot blot
reverso. |
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Figura 1. Interpretación de
las bandas reactivas |
¹
Baño maría con agitación (Stuart
Scientific)
a 80 r.p.m.
² Equipo Perkin-Elmer 2400 |
Resultados
Se estabilizaron los métodos referidos anteriormente, y con
ello se constató que el 100% de nuestras
muestras (80 pacientes) fue positiva para
VPH.
Los genotipos encontrados fueron: 6, 11, 16, 18, 31, 33, 45,
53, 56, 66 y 68. De estos genotipos, están
asociados con un alto riesgo de desarrollo
de cáncer cervical las variantes 18, 31, 51,
52, 68 y 59 (gráfico 1).
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Gráfico 1. Prevalencia de
los genotipos de VPH encontrados
en el estudio. |
El 71% de nuestra muestra presentó infecciones múltiples de
VPH y, el 93,3% al menos un genotipo viral
de alto riesgo para desarrollo de cáncer
cervical (Gráfico 2).
Los genotipos más frecuentes fueron las variantes 6, 11 de
bajo riesgo y 52 de alto riesgo (gráfico 2).
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Gráfico 2:
Tipos de infecciones de VPH en
pacientes estudiados. |
Discusión y Conclusiones
Considerando la frecuencia del cáncer cervical (51% de todos
los cánceres en ION-SOLCA, Guayaquil) y su
relación con el VPH resultó imprescindible
implementar el análisis y tipificación
molecular de los genotipos del virus como
método para aumentar la eficacia del control
clínica en pacientes con infecciones de VPH
de alto riesgo.
La PCR es una de las técnicas moleculares
mas utilizadas debido a que copia millones
de veces, in Vitro, un segmento de ADN, esta
copia exponencial le da, a esta prueba, un
alto nivel de sensibilidad.
El conocer el genotipo del virus es un arma fundamental del
médico para tomar las decisiones clínicas
correctas en los pacientes que poseen
infección con virus de alto riesgo. La
detección con PCR dot blot reverso de los
genotipos se torna entonces en una de las
piezas claves de la edificación de los
protocolos de control que se tomen con los
pacientes.
Es una técnica que no requiere de mayor tiempo, abarata
costos en relación a la secuenciación y
determina los genotipos de alto riesgo y de
mayor frecuencia en comparación a la captura
híbrida que tan solo determina la presencia
o ausencia de genotipos virales de alto
riesgo.
En la población estudiada el 93,3% de los casos presentaron
por lo menos un genotipo de VPH de alto
riesgo. La determinación de genotipo no sólo
permite evaluar el riesgo para la paciencia,
sino que ayuda a focalizar los programas de
prevención del cáncer de cérvix y, el médico
adquiere valiosa información para un
adecuado manejo clínico de la paciente.
Las infecciones múltiples con diferentes genotipos de VPH en
un mismo paciente representan un mayor
riesgo en el desarrollo de cáncer cervical,
resistencia al tratamiento y la posibilidad
de reinfecciones subsecuentes4. En nuestra
población, el 80% de casos presentó
infección con múltiples genotipos.
En cuanto a la prevalencia de los diferentes tipos de virus,
se conoce que el más frecuente es la
variante 16 de alto grado de malignidad,
aunque para nuestra población las variantes
6, 11 y 52 presentaron un predomino con un
23%, 21% y 19% respectivamente.
Los tres grupos predominantes (6, 11 y 52) que son de bajo y
alto riesgo respectivamente, implica que
dentro del estudio se pueden constatar las
diversas combinaciones de genotipos que
puede presentar un paciente.
Los datos obtenidos en nuestro estudio, muestran una
tendencia claramente diferente a lo
reportado para otras poblaciones. La gran
cantidad de casos con infecciones múltiples
sería una de las posibles explicaciones de
la alta incidencia del cáncer de cuello
uterino para nuestra población.
La importancia de estos resultados radica en el hecho de
haber determinado la presencia de
infecciones múltiples que es un factor de
riesgo mayor al simple genotipo viral, este
hecho hace pensar que es necesario un cambio
en las políticas de control epidemiológico
como la vacuna para VPH, con el fin de
disminuir su incidencia.
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